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新葡萄京娱乐app下载双脱氧合成末端

发表时间:2017/1/6 9:13:22 阅读次数:

-./链的延伸终止在 %%.23处。 !!新葡萄京娱乐app下载双脱氧合成末端终止法 -./序列分析操作中要用四个反应管,每一管都加入 -./模板, -./聚合 酶,四种 %.23,其中一种 %.23是用同位素标记的。除此之外,每一管还要加入一种 %%.23,即 /管加入 %%/23,2管加入 %%223,4管加入 %%423,5管加入 %%523。以 /管为例,当模板上碱基是 2时,反应体系 中有两种碱基可与之配对: %/23和 %%/23。如果是 %/23与之配对,引物的延伸还能继续下去。如果是 %%/23与之配对,引物的延伸就会到此终止。 /管中会出现 长短不一,但总是终止在 /位的核苷酸链。另外三管中出现 的情形也如此,即四个反应管分别存在以四种不同核苷酸为 01末端的长度不等的核苷酸链。这四个反应管中核苷酸链的 总的结果是一系列长度只差一个核苷酸的 -./聚合链。聚 合反应结束后,把 ;管内的产物分别加到超薄的聚丙烯酰 胺—尿素变性凝胶板上电泳,这种电泳分辨能力可达到相差 一个核苷酸的水平,四条泳道形成不同的电泳条带。经过放 射自显影,从下向上读即是新合成链 71!01的碱基排列顺序 (图 89 <)。>*? 4&@A$#B法,该法是先用同位素 对 -./片段的末端进行标记,然后用专一的化学试剂对特 定的碱基进行化学修饰,经过修饰的碱基从糖环上脱落,同 时和该糖环相连的磷酸二酯键断


裂,产生在该修饰碱基处断 开的长短不一的 -./片段。硫酸二甲酯专一修饰鸟嘌呤,甲酸修饰嘌呤碱基,肼修饰嘧啶碱基,在有 .*5@存在的条件下,肼只修饰胞嘧啶。分别用上述化学试剂降解 -./,然后电泳。电泳条带从下向上读 即是待测 -./ 71!01的核苷酸序列(图 89 8:)。 第五节 !转基因动物、克隆动物和基因剔除技术 一、转基因动物 !!转基因动物(B#*+C,$+&’ *+&?*@C)是利用基因工程和胚胎工程技术,改变动物遗传性状的新方法,是将 外源基因导入动物的受精卵,再将受精卵植入到代孕动物的输卵管或子宫中培育的动物(图 89 88)。转 基因动物中的外源基因已与动物本身的基因组整合,外源基因随细胞分裂而增殖,在体内得到表达,并传 图 89 8:!化学修饰裂解法测序原理 第十七章 #基因技术#"! 给下一代。也有人先将外源基因导入精子或卵细胞,再让导入外源基因的精子或卵细胞受精,培育转基因 动物。 ##转基因动物能够创造医学研究需要的动物模型、改 良动物品质、培育动物新品种。例如,将大鼠的生长激 素基因导入小鼠受精卵培育的转基因小鼠体重是普通 小鼠的二倍,成为超级鼠。 ##人体内有许多种活性肽和生长因子,它们在体内的 生理功能十分重要,但含量极少,提取和纯化都很困难。 可利用转基因技术将人类的这些基因转入动物的受精 卵,培育转基因动物,从转基因动物的某些产物中提取 这些基因的产物。如将人类的基因转入奶牛,从牛奶里 提取人类基因的产物。或将人类基因转入鸡,从鸡蛋内 提取基因产物。这些转


基因动物就像工厂一样可以源 源不断的提供人类需要的产品,因此称其为动物工厂或 生物工厂。 ##外源基因能够转入动物,建立转基因动物,也可以 转入植物,建立转基因植物。以这些转基因生物为直接 食品或作为原料加工生产的食品为转基因食品。转基 因食品的出现有望帮助解决人们吃饭的难题。但对转 基因食品的安全性还没有取得共识,对目前应不应该把 转基因食品投放市场还存在着争论。 二、克隆动物 ##克隆是英语 $%&’(的音译,即无性繁殖。克隆动物 是生物体通过体细胞进行的无性繁殖以及由无性繁殖 形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群。克隆 动物是多种生物技术结合的产物,是把细胞核转移到去 核的卵细胞中,培育新型生物品种的细胞工程技术。克 隆动物技术主要包括三个步骤。 # #!*制备成熟的卵细胞。 # #)*细胞核移植,将供体细胞的细胞核与去核的 卵细胞融合成一个杂合细胞。 # #+*将“核质融合”的卵细胞移植到借腹怀孕动 物的子宫发育直到出生(图 !" !))。 ##克隆动物的遗传信息完全来自于提供细胞核的 动物,即克隆动物是供核动物的复制品。由此可见, 克隆动物与转基因动物不同。转基因动物是将外源 基因转入动物的受精卵内,产生后代个体的方式仍 然是有性繁殖,只不过后代细胞染色体内插入了外 源基因。克隆动物是将供体细胞核移入到去除了细 !*提取卵细胞; )*提取体细胞; +*卵细胞去核; ,*体细胞核转胞核的未受精卵细胞内,是细胞无性繁殖的产物。 入去核卵细胞; -*筛选;

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